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#Produkttrends
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Alles, was Sie über farbstoffbasierte qPCR wissen müssen
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Lernen Sie Ihre besten Optionen kennen
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Die farbstoffbasierte qPCR ist eine kostengünstige qPCR-Option, die die doppelsträngige DNA-Amplifikation während der PCR (Polymerase-Kettenreaktion) auf der Grundlage des Nachweises der Fluoreszenz eines DNA-Bindungsfarbstoffs misst. Neben der qPCR-Mischung, nukleasefreiem Wasser und DNA werden nur zwei sequenzspezifische Primer benötigt, was sie zu einer kostengünstigen Option für die Untersuchung einer großen Anzahl von Targets macht.
Es gibt viele Gründe, warum die farbstoffbasierte qPCR bei Wissenschaftlern so beliebt ist. Hier sind einige von ihnen:
1. Kosten (nur 2 Primer) - eine kostengünstigere Option als die sondenbasierte qPCR.
2. Einfacher zu entwerfen als sondenbasierte qPCR. Auch hier benötigen Sie nur 2 Primer für die erste Variante. Für letztere sind 2 Primer und eine sehr spezifisch platzierte Sonde erforderlich.
3. Anders als bei der sondenbasierten qPCR ist es möglich, neben dem interessierenden Gen auch Fehler nachzuweisen. So ist es möglich, das Experiment zu optimieren und beim nächsten Mal bessere Ergebnisse zu erzielen.
Leider ist die farbstoffbasierte qPCR, wie jede andere Methode auch, nicht für jeden Versuchsplan ideal. Hier sind einige Nachteile:
1. Es ist nicht möglich, Multiplexing durchzuführen.
2. Sie hat eine geringe Spezifität.
Der wichtigste Teil der farbstoffbasierten qPCR ist natürlich der Farbstoff. Der klassische und wahrscheinlich am häufigsten verwendete Farbstoff ist SYBR® Green. Es gibt jedoch bessere Optionen, die vielleicht noch nicht so populär sind, aber dennoch eine Überlegung wert sind. Eine davon ist EvaGreen®, das spektral ähnlich wie SYBR® Green ist, so dass man bei seiner Verwendung keine optischen Einstellungen ändern muss. Eine weitere Option ist SolisGreen®, das ebenfalls die gleichen spektralen Eigenschaften wie andere häufig verwendete qPCR-Farbstoffe aufweist. qPCR-Mischungen auf der Grundlage des SolisGreen®-Farbstoffs haben eine hohe Empfindlichkeit und eine höhere Leistung (hellere Fluoreszenz) bei niedriger Zielkonzentration, was eine verbesserte Präzision und geringere Varianz zwischen technischen Wiederholungen zeigt.