Wie erhält man qualitativ hochwertige Paraffinschnitte?

Dieser Text vermittelt Ihnen die detaillierten Methoden zum Schneiden qualifizierter Paraffinschnitte.

Das Schneiden von Paraffin ist die am häufigsten angewandte Methode zur Vorbereitung histologischer Schnitte. Beim Schneiden des in Paraffin eingebetteten Gewebes stellen sich jedoch häufig einige Fragen: Warum lässt sich der Wachsblock nicht glatt schneiden? Warum kommt es beim Schneiden leicht zu Schnittbrüchen und Aufrollungen? Warum können die Schnitte beim Ausbreiten nicht geglättet werden? Dieser Text vermittelt Ihnen die detaillierten Methoden zum Schneiden qualifizierter Paraffinschnitte.

Korrekte Fixierung

Nach der Gewebetrennung müssen die Schnitte innerhalb von 1 Stunde fixiert werden.

Die Fixierflüssigkeit muss das 4- bis 10-fache Volumen des Gewebes betragen und eine genaue Konzentration aufweisen. Eine zu dünne und zu reichhaltige Flüssigkeit beeinträchtigt die Gewebeform und den Fixierungseffekt. Wird eine Verschlechterung der stationären Flüssigkeit festgestellt, wie z. B. ein weißer Niederschlag der Formaldehydflüssigkeit, muss sie sofort ausgetauscht werden.

Die Fixierungstemperatur sollte bei der Umgebungstemperatur oder in einem vollständig geschlossenen Gewebeprozessor bei 35-37 °C liegen. Eine zu hohe Temperatur beschleunigt die Autolyse des Gewebes und die übermäßige Kontraktion und zerstört das Antigen und die DNA in den Zellen.

Die Fixierungszeit darf 40 Stunden nicht überschreiten und muss an die Umgebungstemperatur und die Proben angepasst werden.

Angemessene Dehydratisierung

Der Schlüssel zur Dehydratisierung liegt darin, dass die Dauer der Dehydratisierung mit niedrig konzentriertem Alkohol der Dauer der Dehydratisierung mit hoch konzentriertem Alkohol entspricht. Niedrig konzentrierter Alkohol kann die Gewebeschrumpfung verringern und das Schneiden erleichtern. Hochprozentiger Alkohol kann das Gewebe noch stärker austrocknen.

Im Allgemeinen beträgt die Dehydratisierungszeit der Proben (35°C) 1,5 Stunden für 75%igen Alkohol, 2 Stunden für 85%igen Alkohol, 1,5 bis 2 Stunden für 95%igen Alkohol (zweimal) und 1,5 bis 2 Stunden für reinen Alkohol (zweimal). Die Dauer der Dehydratisierung von kleinen Proben unterscheidet sich kaum von derjenigen großer Proben. Normalerweise ist es nicht nötig, sie zu trennen (oft sind kleine Proben aufgrund der dicken Papierverpackung brüchig oder kleben aneinander, was zu einer unvollständigen Dehydratisierung des Gewebes führt). Wenn die Zeit drängt, kann die Dehydratationszeit entsprechend verkürzt werden. Die Dauer der Dehydratisierung steht in engem Zusammenhang mit der Umgebungstemperatur, der Dicke und Art des Gewebes, dem Grad der Gewebefixierung usw.).

Die Gründlichkeit der Dehydratisierung steht in direktem Zusammenhang mit der Transparenz des Gewebes. Eine zu hohe Temperatur (über 50 °C) oder die Verwendung von Aceton während der Dehydratisierung kann leicht zu einer übermäßigen Gewebeschrumpfung und zu verhärtetem und brüchigem Gewebe führen. Es gibt drei Gründe für sprödes Gewebe, die durch Gewebedehydratisierung verursacht werden:

Falsche Zerbrechlichkeit: Aufgrund einer unzureichenden Dehydratisierung kann das Paraffin nicht in das Gewebe eindringen, wenn das Gewebe in Wachs getaucht wird. Wenn das Gewebe bei hohen Temperaturen "gebacken" wird, wird es hart und spröde. Die Schnitte weisen dann pulverförmige oder fadenförmige Teile auf. Harte Gewebe wie Gebärmutter-Leiomyome weisen ebenfalls Kanten auf, und im schlimmsten Fall kollabiert der gesamte Schnitt nach außen. Die Gewebe mit stark unzureichender Dehydrierung werden weich und enthalten sogar Wasser.

Arbeitsschritte bei der Paraffinsektion

Ziehen Sie vor dem Schneiden die entsprechende Sicherungsstange oder Schraube am Mikrotom fest, da es sonst zu einem Überspringen des Schnitts und einer ungleichmäßigen Dicke der Schnitte kommen kann.

Kratzen Sie das restliche Paraffin um den Einbettungsbehälter herum ab, da sich sonst die Probenklemmung lösen kann, was die Qualität des Schnitts beeinträchtigt.

Schneiden Sie den Block korrekt zu und führen Sie zunächst einen Grobzuschnitt durch. Die Dicke beträgt etwa 15-30 Mikrometer, wobei härteres oder kleineres Gewebe dünner geschnitten werden sollte. Nach dem Grobtrimmen, bis alle Gewebe freigelegt sind, kann das Feintrimmen durchgeführt werden.

Der Gefriermodus für Paraffinblöcke wird gewählt, und die Eisbox ist dem Gefriertisch überlegen. Verwenden Sie einen Eiskasten, um Paraffinblöcke durch Zugabe von Wasser zu befeuchten. Sie hat die Vorteile einer schnellen Gefriergeschwindigkeit, geringer Größe, niedriger Betriebskosten und keiner externen Stromversorgung.

Halten Sie das Handrad während des Paraffinschneidens mit gleichmäßiger und sanfter Kraft, und das Schütteln sollte weder zu schnell noch zu langsam sein. Eine zu hohe Geschwindigkeit führt zu einer ungleichmäßigen Schnittdicke und erschwert die Ausdehnung des Schnitts. Eine zu niedrige Geschwindigkeit führt zu einer Verdickung des Profils. Die Abschnitte müssen vollständig, dünn und gleichmäßig sein.

Nach dem Paraffinschnitt legen Sie den Schnitt zunächst in kaltes Wasser und dann in heißes Wasser, damit der Schnitt dünner wird und weniger Falten und Blasen aufweist. Die Wassertemperatur des ausgebreiteten Schnitts sollte zwischen 42 und 55 °C liegen, was mit dem Schmelzpunkt des Einbettungsparaffins zusammenhängt. Wenn die Wassertemperatur zu hoch ist, lösen sich die Gewebe und Zellen auf. Ist die Wassertemperatur zu niedrig, können die Falten der Schnitte nicht geglättet werden.