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Isolierung von mononukleären Zellen aus peripherem Blut

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Isolierung von Blutzellen

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Haben Sie Angst, dass es nicht klappt? Nicht nötig, nach der Messung vor Ort ist die Wirkung wie in der Abbildung unten dargestellt.

Besorgt, dass das Bild gefälscht ist? Das brauchen wir nicht. Wir können es an Ort und Stelle machen. Menschliche periphere mononukleäre Blutzellen wurden aus peripherem Blut isoliert. Periphere mononukleäre Blutzellen (PBMC) sind Zellen mit mononukleären Zellen im peripheren Blut, einschließlich Lymphozyten und Monozyten.

Das spezifische Gewicht der mononukleären Zellen (Lymphozyten und Monozyten) im peripheren Blut liegt zwischen 1,075 und 1,090, Erythrozyten und Granulozyten liegen zwischen 1,092 und 1,030 bis 1,035, so dass eine Lösung mit einem spezifischen Gewicht zwischen 1,075 und 1,092, die nahezu isotonisch ist, für die Dichtegradientenzentrifugation verwendet werden kann. Die Zellen eines bestimmten Anteils werden gemäß der entsprechenden Dichtegradientenverteilung getrennt.

Die grundlegenden Anforderungen an die abgetrennten Medien sind:

(1) nicht toxisch für Zellen

② Grundlegend isotonisch

③ unlöslich in Plasma und getrennten Substanzen

④ Es gibt eine spezifische Schwerkraft.

Ficoll-Trennlösung (zwei Teile 6%ige destillierte Polysucroselösung gemischt mit einem Teil 34%iger Panditumin-Normal-Salzlösung) war die herkömmliche Lymphozyten-Trennlösung mit einem spezifischen Gewicht von 1,077 ±0,002, die hauptsächlich für die Isolierung mononukleärer Zellen aus peripherem Blut verwendet wurde.

Getrennte Schritte

1. Entnahme von frischem, gerinnungshemmendem Vollblut in einem 15-ml-Zentrifugenröhrchen

2. Geben Sie eine entsprechende Menge Trennflüssigkeit in das Zentrifugenröhrchen und verdünnen Sie es 1:1 auf 10 ml Lösung.

3. Das Röhrchen in eine langsam laufende Zentrifuge mit einem horizontalen Rotor von 800xg geben und 20 Minuten lang zentrifugieren

Nach der Zentrifugation ist eine deutliche Schichtung zu erkennen: die oberste Schicht ist die verdünnte Plasmaschicht, die mittlere Schicht ist die transparente Trennflüssigkeitsschicht, die weiße Membran zwischen Plasma und Trennflüssigkeit ist die mononukleäre Zellschicht, und der Boden des Zentrifugationsröhrchens besteht aus den roten Blutkörperchen und den Granulozyten.

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